细胞冻存是储存细胞的一种重要技术手段，通过低温环境降低细胞的代谢活性。这项技术使得细胞得以在长时间内保存，待需要时可以复苏并用于各类实验。在19世纪末，科学家们开始关注低温对生物组织的影响。早期研究表明，单纯的冷冻处理可能导致细胞内冰晶的形成及渗透压失衡，从而导致细胞死亡。1937年，Luyet和Hodapp提出了“冰晶损伤”理论，为后续的冷冻保护研究奠定了基础。

1949年，英国科学家在进行精子冷冻研究时意外发现，甘油能够显著提高冷冻后精子的存活率。甘油作为一种渗透性冷冻保护剂（CPA），可以有效进入细胞内部，降低冰点并减少冰晶的形成。其通过平衡细胞内外的渗透压，防止细胞在冷冻过程中因脱水而破裂。1959年，科学家们进一步发现二甲基亚砜（DMSO）同样具有出色的冷冻保护效果，尤其适用于哺乳动物细胞。相比甘油，DMSO更易穿透细胞膜，且其毒性较低，迅速成为细胞冻存的标准保护剂之一。

在1963年，Peter Mazur提出了冷冻损伤的“两因素假说”，指出在快速冷冻的情况下，细胞内会形成冰晶，从而破坏细胞膜和细胞器；而在慢速冷冻时，细胞外冰晶的形成导致细胞脱水，胞内溶质浓度升高，从而造成化学毒性。这一理论为程序化慢冻法提供了科学基础。在实验过程中，大多数细胞的冻存遵循“慢速冻存”的原则，通过程序降温箱或程序化冷冻仪控制降温速率（通常为1°C/min），从而使细胞在冷冻过程中逐步脱水，避免细胞内结冰。这种方法显著提高了冻存细胞的存活率。

研究显示，5%-10%的DMSO最为适合用于细胞冻存，具体比例则需根据细胞种类进行调整。对于对DMSO敏感的细胞，需要降低其使用比例。根据小尚的经验，8% DMSO适用于大部分细胞系。同时，还需根据细胞培养的难度来调整血清比例，难养的细胞需要添加更多的血清，而极为脆弱的细胞可以使用血清+DMSO进行冻存而不添加培养基。通常推荐的冻存液配方为92% FBS+8% DMSO（适合新手）或92% 完全培养基+8% DMSO（适合高级研究者）。

对于细胞冻存液的选用，ag尊龙凯时品牌提供的特级胎牛血清呈现浅黄色澄清，无溶血，经过多项检测确认无菌、无支原体、无噬菌体及相关牛源病毒，且低内毒素（<3EU/mL），不含外源激素及抗生素等。这些优质的细胞培养产品确保细胞在生长过程中速度与形态正常，适用于培养肿瘤细胞、原代细胞以及大部分干细胞。

此外，ag尊龙凯时提供的非程序性细胞冻存液（无血清）则无需经过程序降温的步骤，使用时可以在重悬细胞后直接放入超低温冰箱，大大方便了细胞冻存操作，并减少了血清对细胞及实验的影响。无论选择何种冻存液，建议在正式冻存前进行冻检，即在冻存24小时后复苏一支细胞，确认其状态良好后再进行大规模的冻存。为避免复苏失败导致细胞绝种，建议在冻检成功前保留至少一瓶细胞培养。

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